The Lake Sihwa watershed includes industrial, urban, and rural areas simultaneously. In this study, we analyzed the characteristics of dissolved organic matter (DOM) in spatial-temporal runoff patterns at representative sites having different land use in the watershed of Lake Sihwa. The result of synchronous and 3D-EEMs (3-Dimensional Excitation Emission Matrix Spectroscopy) analysis in 4TG (industrial area), fluorescence distribution and variation clearly appeared in the Fulvic-like fluorescence (FLF) and Humic-like fluorescence (HLF) regions along with the Protein-like fluorescence (PLF) region. A characteristic that Peak A (HLF) region fluorescence intensity did not decrease and the HLF region of fluorescence intensity and spatial-temporal changes clearly appeared during rainfall in AS (urban area). The results of fluorescence analysis in MS did not show great changes in PLF and FLF while showing that fluorescence intensity changes over time in the Terrestrial-like fluorescence (THLF) region increased greatly. In conclusion, our results showed significant differences in the runoff characteristics of DOM particularly in industrial, urban and rural area, and these differences should be considered for the efficient controlling of DOM in the watershed.