Human astrovirus (HAstV) is the second most important cause of viral diarrhea and acute gastroenteritis in infants under five. However, determination of the infectivity of the clinical isolates is uneasy and the replication cycle of HAstV is not yet fully understood. In this study, it was attempted to detect negative sense (-)RNAs generated during the replication of RNA viruses. We used clinical isolates of HAstV to infect CaCo-2 cells. Reverse transcription using sense primer only followed by PCR using both sense and antisense primer showed that (-)RNAs were first detected in CaCo-2 cells between 9 and 12 hours post infection (p.i.). However, these (-)RNAs were not detected when cells were treated with protein synthesis inhibitor cycloheximide during the HAstV infection. Then, RT with antisense primer only followed by PCR was performed to detect (+)RNA of HAstVs after production of (-)RNAs during the replication. RT-PCR results using antisense primer revealed that the amount of (+)RNA began to increase from 9 hr p.i., indicating the accumulation of the newly synthesized (+)RNA genome. Cycloheximide was observed to abrogate the increase of newly made (+)RNA during HAstV infection. In conclusion, the use of sense or antisense primer during RT reaction together with cycloheximide enabled us to quantitatively detect (-)RNAs and proved to be a useful tool in understanding the replication cycle of HAstV. 
Key words: human astrovirus, (-)RNAs, sense primer