In an effort to rapidly and conveniently detect infectious waterborne human rotaviruses (HRVs) that cause diarrhea in infants and children, we developed the first-ever cell-culture-based immunochromatography (CBIC) method. The immunochromatography kit developed interacted only with the HRV VP6 antigen, and CBIC using MA104 cells detected HRV with a sensitivity of up to 1.99 TCID50/mL. This detection sensitivity was similar to that of the cytopathic effect-based method, and no real difference was observed between it and that of the real-time RT-PCR method, which is known to have a relatively high sensitivity. Further, while TCVA can only determine the presence of waterborne viruses, the CBIC method is advantageous because it accurately detects only HRV. Compared with the real-time RT-PCR method, the CBIC method is advantageous because it requires a relatively simple process that enables easier quality control and lower test costs. In conclusion, this study proposed a new method for the detection of HRVs, and we proved that this CBIC method could effectively be applied for the detection of HRVs in aquatic environments.